Fråga  |
Svar |
Ludzie hetero-czy mono zygotami i jak długi jest ich łańcuch genowy börja lära sig
|
|
są heterozygotami oraz mają dłigośc 1/500 pz
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
single nucleotide polymorphism
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
|
|
|
pozbawienie zwierzęcia doświadczalnego określonego genu börja lära sig
|
|
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
porównawcza analiza różnych genotypów
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
wiedza o zespołach białek wytwarzanych przez komórki, tkanki, narządy
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
badania regulacji ekspresji genów na poziomie transkrypcji
|
|
|
Rekombinacja DNA in vitro jest możliwa dzięki? börja lära sig
|
|
enzymom restrykcyjnym Endonukleazy
|
|
|
Gdzie znaleziono Endonukleazy? börja lära sig
|
|
Znalezione jedynie w komórkach bakterii i sinic
|
|
|
Czemu zapobiegają Endonukleazy u bakterii i sinic? börja lära sig
|
|
Zapobiegają włączenie obcego DNA do genomu bakterii
|
|
|
Jaką długość ma sekwencja zwykle rozpoznawana przez Endonukleaze? börja lära sig
|
|
specyficzna sekwencja dwuniciowego DNA ma zwykle długość 4-8 par zasad
|
|
|
Aktywność „star” Endonukleaz co oznacza? börja lära sig
|
|
Oznacza to ze trzeba zwrócić uwagę na warunki oznaczone przez producenta gdyż b uzyskać oczekiwany efekt trzeba przeprowadzić reakcje w warunkach podanych przez producenta
|
|
|
w jakiej długości światła są wykrywane zasady aromatyczne börja lära sig
|
|
światło o długości 260 nm
|
|
|
w jakiej długości światła są wykrywane Białka börja lära sig
|
|
światło o długości 280 nm
|
|
|
Od czego zależy współczynnik ekstrakcji börja lära sig
|
|
od długości badanej cząsteczki
|
|
|
Absorpcja największa jest dla czego a najmniejsza dla czego börja lära sig
|
|
Absorpcja największa dla nukleotydów a najmniejsza dla dsDNA
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
|
|
|
DsDNA o stęż 1mg/ml - A260 börja lära sig
|
|
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
|
|
|
Co ma wyższy współczynnik ekstrakcji puryny czy pirymidyny börja lära sig
|
|
Puryny mają wyższy współczynnik ekstrakcji niż pirymidyny
|
|
|
Co powoduje topnienie (ogrzewanie) börja lära sig
|
|
|
|
|
Co powoduje szybkie ochładzanie? börja lära sig
|
|
minimalny spadek absorbancji
|
|
|
Co powoduje wolne ochładzanie? börja lära sig
|
|
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
zdolność do izolacji od gospodarza i replikacji
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
klonowania większych fragmentów
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
klonowania fragmentów jednoniciowych
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
zbiory sklonowanych przypadkowo fragmentów genomu DNA/cDNA
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
analiza fragmentów klonu po cięciu restryktazami
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
czyli takie, które są zdolne do przyjęcia obcego DNA przez działanie na nie jonami Ca2+, Mn2+ i Rb2+
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
przechowywane są najpierw w płynnej pożywce z antybiotykiem (selekcja) a następnie zamrażane z glicerolem (nie tworzą się kryształy) → tzw. zapas glicerolowi
|
|
|
Co pozwala odnaleźć polarność klonów cDNA börja lära sig
|
|
|
|
|
W czym są umieszczone polarne startery? börja lära sig
|
|
Są umieszczone w postaci oligo(dT)
|
|
|
Polarne startery są komplementarne do? börja lära sig
|
|
|
|
|
W klonach genomowych jakie mamy geny? börja lära sig
|
|
Nie wiadomo od razu gdyż obecność genów nie jest oczywista
|
|
|
W klonowany genomach wiemy o jego polarności? börja lära sig
|
|
Nie za bardzo gdyż polarność nie jest oczywista w klonowanych genach
|
|
|
Hybrydyzacja i mapowanie pozwana nam określić? börja lära sig
|
|
Organizowanie klonowanych genów
|
|
|
na podstawie czego przygotowuje się Sondy börja lära sig
|
|
na podstawie Southerna części sekwencji cDNA
|
|
|
Co można wykazać na podstawie Sondy przygotowanej metodą Southerna? börja lära sig
|
|
Można określić która część klonu genomowego zawiera sekwencje komplementarne do sond.
|
|
|
Mapowanie za pomocą nukleazy S1: börja lära sig
|
|
Identyfikacja końca 3’/5’ - hybrydyzacja transkryptu z dłuższym antysensownym fragmentem na jednym końcu Usuwanie fragmentów jednoniciowych - poddanie hybryd działaniu nukleazy S1 Określanie wielkości pozostałych dwuniciowych fragmentów - elektroforeza
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Starter jest wydłużany przez polimerazę dopóki nie osiągnie końca matrycy Następnie dochodzi do oddysocjowania polimerazy Długość wydłużonego fragmentu wskazuje na koniec 5’ matrycy
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Zmieszanie ekstraktu białkowego ze znakowanym fragmentem DNA Rozdział mieszaniny w niedenaturującym żelu poliakryloamidowym Ujawniają się kompleksy DNA-białko w postaci prążków retardacyjnych (opóźnionych)
|
|
|
Technika „odcisku stopy” z udziałem DNazy I börja lära sig
|
 |
„Odcisk stopy” białka związanego specyficznie z sekwencją DNA Może zostać ujawniony poprzez działanie małą ilością DNazy I na mieszaninę DNA i białka poddaje się analizie elektroforetycznej
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
|
|
|
W jakim celu przyłącza się geny reporterowe? börja lära sig
|
|
W celu zidentyfikowania funkcji jakiegoś promotora
|
|
|
Po przyłączeniu geny reporterowego co się bada börja lära sig
|
|
Bada się ilość powstałego produktu białkowego
|
|
|
Jak określimy ważność poszczególnych sekwencji? börja lära sig
|
|
poprzez dokonywanie progresywnych delecji DNA z jednego końca
|
|
|
Co pozwala uzyskać jednokierunkowe delecje? börja lära sig
|
|
Egzonukleaza III - Usuwa kolejne nukleotydy w kierunku 3’→5’, gdzie koniec 3’ w dwuniciowy DNA jest cofnięty w stosunku do 5’
|
|
|
łączenie fragmentów sekwencji börja lära sig
|
|
Powstałe cząsteczki poddaje się ligacji
|
|
|
Mutageneza ukierunkowana? börja lära sig
|
|
Uzyskiwanie zmian jednego lub kilku nukleotydów w określonym miejscu sekwencji
|
|
|
Jak przeprowadza się mutagenezę börja lära sig
|
|
W tym celu wykorzystuje się przyłączanie mutagennego startera i syntezę komplementarnego DNA z użyciem polimerazy DNA
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Dawniej - jednoniciowe matryce przygotowane z użyciem wektorów M13
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Obecnie - matryce otrzymane metodą PCR
|
|
|
Cel mutagenezy metodą PCR börja lära sig
|
|
amplifikacja fragmentów DNA od strony 5’ lub 3’
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Wytwarzanie: zrekombinowanego białka, GMO, „odcisku DNA”, przygotowywanie zestawów diagnostycznych, terapie genowe
|
|
|
Jak powstaje zrekombinowane białko börja lära sig
|
|
może być produkowane dzięki wprowadzeniu genu rzadko występującego białka do plazmidu i poddanie ekspresji w bakteriach, gdy krytycznym etapem jest modyfikacja potranslacyjna, gen może być poddany ekspresji w kom. eukariotycznych
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
powstaje poprzez wprowadzenie obcy gen do komórki, z której można zregenerować cały organizm
|
|
|
Jak powstaje „Odcisk DNA” börja lära sig
|
|
hybrydyzacja, przeniesionego metodą Southerna, genomowego DNA z sądami, które rozpoznają proste powtórzenia nukleotydów prowadzi to do otrzymania obrazu, który jest unikatowy dla danego osobnika i może być stosowany do jego identyfikacji.
|
|
|
Terapia genowa - próby skorygowania genetycznych zaburzeń przez wprowadzenie do organizmu pacjenta prawidłowej kopii genu börja lära sig
|
|
próby skorygowania genetycznych zaburzeń przez wprowadzenie do organizmu pacjenta prawidłowej kopii genu
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
A260/A280 = 1,8 -czyste DNA A260/A280 < 1,8 -zanieczyszczone białkiem A260/A280 > 1,8 -zanieczyszczone RNA
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
To inaczej równowagowe wirowanie w gradiencie stężeń chlorku cezu
|
|
|
Co umożliwia Wirowanie izopikniczne börja lära sig
|
|
Umożliwia analizę DNA i jego oczyszczanie
|
|
|
Co z RNA i białkami podczas wirowania izopiknicznego? börja lära sig
|
|
RNA w dół, białka flotują = unoszą się
|
|
|
elektroforeza mikrokapilarna börja lära sig
|
|
z wykorzystaniem macierzy
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
w wolnym buforze, niewielkie cząsteczki, w cienkiej kapilarze kwarcowej
|
|
|
elektroforeza w żelu poliakrydynowym börja lära sig
|
|
|
|
|
elektroforeza W żelu agarozowym börja lära sig
|
|
|
|
|
elektroforeza W polu pulsacyjnym börja lära sig
|
|
20kpz - 10 Mpz (oddziela cząsteczki wielkości 100 kpz!)
|
|
|
Choroba Takahary = alaktazemia börja lära sig
|
|
Gen kontrolujący syntezę katalazy - krótkie ramię chromosomu 11 - 11p13
|
|
|
Mechanizm Choroba Takahary = alaktazemia börja lära sig
|
|
redukuje aktywność katalazy
|
|
|
objawy Choroba Takahary = alaktazemia börja lära sig
|
|
Owrzodzenia śluzówek jamy ustnej, podudzi oraz wczesne wypadanie zębów
|
|
|
gdzie najczęsciej występuje Choroba Takahary = alaktazemia börja lära sig
|
|
Najwyższa częstość występowania mutacji w Japonii
|
|
|
Dziedziczenie Choroba Takahary = alaktazemia börja lära sig
|
|
|
|
|
Wrażliwość na chlorek suksametonium - börja lära sig
|
|
zwiotczenie mięśni, efekt szybki ale tez szybko znika(za hydrolizę sukcynylocholiny odpowiedzialnej za objawy odpowiada cholinoesteraza- jej gen na 3 chromosomie i tam mutacja)
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
przez leki znieczulenia ogólnego: antyestetyki, zwioty, glikozydy naparstnicy. Wzrasta napięcie mięśni prążkowanych, drżenie mięśniowe, tachykardia, wzrost temp. ciała (1C w ciągu 5 min) Mutacja 19q13.1
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
gen 11p13, autosomalna recesywna
|
|
|
Metabolizm alkoholu etylowego- 2 enzymy börja lära sig
|
|
dehydrogenaza alkoholowa ADH (chromosom 4) i dehydrogenaza aldehydowa ALDH (1-chromosom 9, 2-chromosom 12) Najczęściej u Azjatów
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
porfiryny to prekursory hemu i składniki enzymów: wątrobowe i erytropoetyczne. Deficyty enzymów biorących udział w przemianach porfiryn. OPP=> wątrobowe. Autosomalnie dominująco.
|
|
|
Krzywica oporna na wit D3 börja lära sig
|
|
gen VDR dominująco w sprzężeniu z chromosomem X
|
|
|
Niedobór dehydrogenazy glukozo-6-fosforanowej börja lära sig
|
|
|
|
|
Niedobór alfa-1-antytrypsyny börja lära sig
|
|
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
gen PON1 na chromosomie 7 sprzężony z genem CFTR
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
gen HFE na chromosomie 6, autosomalnie recesywnie
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
3 allele na chromosomie 3
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
autosomalnie recesywnie, 12q24.1
|
|
|
Co wywołuje ostrą porfirię? börja lära sig
|
|
Leki (barbiturany, sulfonamidy, przeciwbólowe, antykoncepcyjne, antybiotyki, alkaloidy sporyszu, etanol), infekcje, głodzenie, duży wysiłek fizyczny.
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
W pH obojętnym - ketonowa, w zasadowym - enolowa
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Działanie ultradźwiękiem o dużej intensywności na DNA co prowadzi do uszkodzenia DNA i zmniejszenia jego lepkości.
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Puryny: adenina i guanina (2 piescienie) Pirymidyny: cytozyna, tymina, uracyl (1 pierścień)
|
|
|
Liza alkaliczna (element minizolacji plazmidów) börja lära sig
|
|
Metoda oczyszczania plazmidowego DNA z chromosomowego DNA i innych
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Autonomiczne, pozachromosomowe elementy genetyczne W postaci kolistych/liniowych cząsteczek DNA
|
|
|
PCR - łańcuchowa reakcja polimerazy börja lära sig
|
|
Do amplifikacji sekwencji DNA Z użyciem pary oligonukleotydowych starterów Każdy jest komplementarny do jednego końca docelowej sekwencji DNA Termostabilna polimeraza DNA powoduje wzajemne wydłużanie się ku sobie starterów
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Etapy: denaturacja (95°C), przyłączenie startera (55°C), polimeryzacja (72°C) Elementy wymagane: matryca, startery, bufory, enzym, Mg2+, dNTP
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
Startery: para oligonukleotydów o długości 18-30 pz i podobnej zawartości G+C
|
|
|
|
börja lära sig
|
|
termostabilna (odporna na denaturację) polimeraza DNA np. Taq
|
|
|
